Д. Особенности репликации вирусов

1. Двунитчатая ДНК - рядовая полуконсервативная репликация.

2. Однонитчатая ДНК – репликация происходит через стадии репликативной формы и промежной репликативной формы.

3. Однонитчатая РНК – репликация происходит через две стадии.
Сначала на вирионной РНК (вРНК) синтезируются комплементарные РНК
(кРНК). Потом на кРНК синтезируются вирионные РНК.

4. Репликация однонитчатой РНК ретровирусов происходит с ролью оборотной транскриптазы. Сначала на вРНК Д. Особенности репликации вирусов оборотная транскриптаза синтезирует минус-цепь ДНК, а потом на ней синтезирует плюс-цепь ДНК. Двунитевая ДНК служит матрицей для синтеза вРНК.

5. Размножение вируса гепатита В также протекает с ролью оборотной транскриптазы. Сначала клеточная РНК-полимераза синтезирует на вирусной ДНК прегеномную РНК, а потом вирусная оборотная транскриптаза синтезирует на ней минус Д. Особенности репликации вирусов-цепь ДНК, на которой потом достраивает плюс-цепь ДНК.

Е. Способы микробиологической диагностики вирусных болезней

1. Вирусоскопический – обнаружение в исследуемом материале при помощи способов электрической микроскопии вирионов либо при помощи светооптической микроскопии вирионов либо внутриклеточных включений.

2. Обнаружение вирусов в исследуемом материале при помощи способов иммуноэлектронной микроскопии.

3. Вирусологические способы – выделение незапятнанных культур вирусов Д. Особенности репликации вирусов и их идентификация с внедрением культур клеток либо куриных зародышей.

4. Серологические способы – обнаружение антивирусных антител в сыворотке хворого либо реконвалесцента при помощи реакций нейтрализации вирусов, реакции связывания комплемента, реакции торможения гемагглютинации, иммуноферментного анализа (ИФА), радиоиммунного способа (РИМ), реакции пассивной гемагглютинации (РПГА), реакции гемагглютинации иммунного прилипания (комплекс АГ+АТ Д. Особенности репликации вирусов в присутствии комплемента адсорбируется на эритроцитах), реакции преципитации в агаре, иммунофлуоресцентного способа. Эти же реакции могут быть применены и для обнаружения вирусных ан­тигенов в исследуемом материале.

5. Био способы – инфецирование чувствительных к данному вирусу лаборатор-ных животных с целью проигрывания заболевания либо следующего выделения вируса.

6. Молекулярно-генетический – при Д. Особенности репликации вирусов помощи полимеразной цепной реакции (ПЦР) либо гибридизации нуклеиновых кислот (ДНК- и РНК-зонды) определяют в исследуемом материале наличие возбудителя вирусного заболевания по специфическим для него последовательностям нуклеотидов.

З А Н Я Т И Е9

Дата ______________

Тема: Идентификация вирусов. Серодиагностика. Генетические способы диагностики (молекулярная гибридизация, полимеразная цепная реакция (ПЦР Д. Особенности репликации вирусов).

Итоговое контрольное занятие «Общая вирусология и генетика».

План занятия:

1.Культивирование вирусов в культурах тканей (окончание):

а) исследование цитопатического эффекта - макро- и микроскопии культур клеток, зараженных вирусом осповакцины;

б) выявление размножения вирусов в культуре ткани реакцией гемадсорбции (демонстрация готовых препаратов);

в) обнаружение вируса в культуре ткани способом цветной пробы (демонстрация);

г) выявление вируса Д. Особенности репликации вирусов в культуре ткани способом бляшек (демонстрация);

д) обнаружение вируса в культуре ткани при помощи флуоресцирующих антител. Разбор методики.

2. Культивирование вирусов в курином зародыше (окончание):

а) вскрытие зараженных куриных зародышей и исследование конфигураций в их;

б) постановка реакции гемагглютинации;

в) определение типа вируса гриппа в аллантоисной воды при помощи Д. Особенности репликации вирусов реакции торможения гемагглютинации (РТГА).

3. Итоговый контроль по теме «Общая вирусология и генетика МО».

Методические указания

1. а) Цитопатический эффект - дегенерация клеток, возникающая под действием размножающегося в культуре ткани вируса. Микроскопически цитопатическое действие выражается в разных конфигурациях морфологии клеток, образовании циклопических многоядерных клеток (симпластов), пикнозе ядер и, в конце концов, в полной деструкции Д. Особенности репликации вирусов клеток. Макроскопически приметно слущивание клеток со стен пробирки. Нрав клеточной дегенерации зависит, в главном, от вида вируса.

Промикроскопировать культуру ткани, зараженную вирусом осповакцины. Зарисовать.

б) Гемадсорбция – адсорбция эритроцитов на поверхности пораженных вирусом клеток.

Методика реакции. В пробирки о зараженной вирусом культурой ткани заносят 0,2 мл 0,4% взвеси эритроцитов. Пробирки Д. Особенности репликации вирусов встряхивают и оставляют в наклонном положении. Продолжительность контакта эритроцитов с клеточками находится в зависимости от температуры инкубация и вида вируса. Учёт реакции создают под малым повышением микроскопа после недолговременного покачивания пробирки для отделения неадсорбированных эритроцитов от поверхности клеток. При вирусной гемадсорбции эритроциты крепко фиксированы на клеточках и сохраняются Д. Особенности репликации вирусов на их после 1-2-кратного отмывания. Адсорбируясь на поверхности пораженных вирусом клеток, эритроциты образуют соответствующие скопления.

Зарисовать картину гемадсорбции.

Культура клеток, зараженная вирусом _______________ (цитопатический эффект) расцветка по Романовскому Реакция гемадсорбции расцветка по Романовскому

в) Цветная реакция. В базу реакции положено то событие, что в процессе размножения и роста клеток в питательной среде скапливаются Д. Особенности репликации вирусов кислые продукты обмена веществ, снижающие рН среды. В ткани, зараженной вирусом, наступает дегенерация клеток, в силу чего угнетается их метаболизм и не происходит изме­нение рН среды. Для выявления этих конфигураций в питательную среду добавляют индикатор феноловый красноватый. При рН выше 7 цвет индикатора красноватый, при рН 7 – оранжевый Д. Особенности репликации вирусов и при рН ниже 7 – желтоватый.

Если клеточки не заражены вирусом (либо он нейтрализован специфичной сывороткой), рH питательной среды двигается в кислую сторону, и она становится желтоватой. В случае размножения вируса клеточки дегенерируют, и среда сохраняет начальный красноватый цвет.

Способ цветных проб может быть применен для титрования ви­руса либо Д. Особенности репликации вирусов вируснейтрализирующих антител.

Цветные пробы зарисовать.

г) Способ бляшек предложен Р. Дюльбекко для получения изолированных колоний вируса. В базе способа лежит возникновение в монослое зараженных вирусом клеток обесцвеченных участков, состоящих из дегенерированных клеток. Эти участки, получившие заглавие бляшек, представляют собой колонии вируса, образующегося из одной вирусной частички.

Способ заключается в последующем. В Д. Особенности репликации вирусов особом флаконе на стене выращивают монослой клеток, потом убирают питательную среду. Клеточки заражают вирусом и заливают агаром, содержащим индикатор нейтральный красноватый. Там, где происходит рост клеток, среда поменяется в кислую сторону, и индикатор окрасится в розовый цвет. На тех участках, где клеточки погибли под действием вируса, рН среды Д. Особенности репликации вирусов и, как следует, цвет индикатора не меняется. Такие островки неокрашенной среды имеют вид беловатых бляшек разной формы и величины, что находится в зависимости от вида вируса.

Парадокс бляшкообразования зарисовать.

Способ цветных проб: 1 – культура ткани, не заражённая вирусом; 2– культура ткани, заражённая вирусом Культура ткани, заражённая вирусом полиомиелита (парадокс бляшкообразования)

д) Способ Д. Особенности репликации вирусов флуоресцирующих антител основан на возникновении специфичного свечения в местах локализации вируса при обработке зараженной ткани флуоресцирующими антителами. Заражаемую культуру ткани выращивают на стеклянных пластинках. Продукт промывают физиологическим веществом, подсушивают и фиксируют в ацетоне при 4°С в течение 10 мин. Потом продукт окрашивают специфичной флуоресцирующей сывороткой в течение 30 мин Д. Особенности репликации вирусов при 37°С. После расцветки продукт промывают физиологическим веществом и высушивают. Просмотр продукта создают при помощи люминесцентного микроскопа.

2. а) Вскрытие куриных зародышей. Работу проводят в стерильных критериях. Яичко ставят воздушным мешком наверх, место вскрытия смазывают спиртом, йодом, снова спиртом, обжигают, снимают колпачок и ножницами убирают прилегающую к отверстию часть скорлупы. Пинцетом Д. Особенности репликации вирусов снимают подскорлупную обо­лочку, прокалывают пастеровской пипеткой хорионаллантоисную обо­лочку и из полости отсасывают аллантоисную жидкость, содержащую вирус. Жидкость помещают в стерильную пробирку.

Для исследования хорионаллантоисной оболочки из яичка убирают всё содержимое. Оболочка остается на внутренней поверхности скорлупы либо выпадает совместно с содержимым яичка. Оболочку осторожно вынимают пинцетом, помещают в Д. Особенности репликации вирусов чашечку Петри, промывают физиологиче­ским веществом, кропотливо расправляют и рассматривают на черном фоне конфигурации, имеющиеся в ней. Конфигурации на оболочке строго специфичны. К примеру, вирус осповакцины вызывает образование бессчетных беловатых втянутых в центре бляшек.

б) Реакция гемагглютинации. Аллантоисную жидкость инспектируют на содержание вируса методом агглютинации куриных эритроцитов на стекле Д. Особенности репликации вирусов (и в пробирках - титрование вируса). Для постановки реакции на стекле к капле вируссодержащего материала добавляют одну каплю 5% взвеси эритроцитов. Реакция проходит в течение 5 мин.

Реакция гемагглютинации

1 – опыт (к капле аллантоисной воды, содержащей вирус гриппа, добавляют каплю 5% взвеси куриных эритроцитов) 2 – контроль (эритроциты + физ. р-р).

в) Реакция торможения гемагглютинации (РТГА Д. Особенности репликации вирусов) может быть применена для определения типа ви­руса либо типа и титра антител. Для определения типа вируса на пред­метное стекло наносят по одной капле вирусосодержащего материала (количество капель должно соответствовать количеству сывороток). В приготовленные капли поочередно заносят по одной капле типовых сывороток. Контролем служит физиологический раствор и обычная Д. Особенности репликации вирусов сыворотка. Потом в каждую каплю заносят по одной капле 5% взвеси эритроцитов. Итог регистрируют через 5 мин. При согласовании вируса типу сыворотки антитела связывают гемагглютинин вируса, и гемагглютинация не наступает (РТГА положительная). Эта реакция может быть поставлена и в пробирках с целью титрования вируса либо анти­тел (антигемагглютининов).

Схема определения типа вируса Д. Особенности репликации вирусов реакцией торможения гемагглютиниции.

В каплю вируссодержащей воды добавляют каплю типовой сыворотки и каплю 5% взвеси эритроцитов. К– контроль (эритроциты + физ. раствор).
Заключение:__________________________________________________________ _____________________________________________________________________

Контрольные вопросы

Как обнаруживают наличие вируса в культуре ткани?

Почему при размножении вируса цвет среды не меняется?

С какой целью может быть применен способ цветных проб?

Какие конфигурации наступают Д. Особенности репликации вирусов в клеточках при размножении вируса?

Как ставят реакцию гемадсорбции? Как смотрится положительная реакция гемадсорбции?

Что собой представляет способ бляшек?

Как обнаруживают вирус гриппа в курином зародыше?

Как вскрывают зараженный зародыш?

Почему происходит реакция агглютинации эритроцитов в присутст­вии вируса гриппа? Каковой механизм этой реакции?

Что такое реакция торможения (нейтрализация Д. Особенности репликации вирусов) гемагглютинации? Зачем она употребляется?

Как обнаруживают конфигурации в хорионаллантоисной оболочке, вы­званные вирусом?

Приложение к ЗАНЯТИЮ 9.


d-97-rashodi-budushih-periodov-d-19-k-51.html
d-a-chernishev-ulyanovskij-gosudarstvennij-universitet-g-ulyanovsk.html
d-a-pospelov-statya-posvyashena-sozdaniyu-sistem-virtualnoj-realnosti-i-svyazannim-s-etim-problemam-vnej-delaetsya-vivod-chto-granica-prinyatiya-ili-neprinyatiya-virtualnogo-mira-prohodit-po-linii-otkaza-ot-privichnogo.html